蛋白質(zhì)定量實(shí)驗(yàn)步驟
更新時(shí)間：2017-05-19 點(diǎn)擊次數(shù)：2256
(1) 準(zhǔn)備 100~1500 ug/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品, 溶于 Bradford 法相兼容緩沖液中。對(duì)于較稀的樣品，可能通過增加樣品在試劑體積中的比率而擴(kuò)大靈敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果樣品與染料的比值太高, 可能會(huì)增加反應(yīng)混合物的 PH 而導(dǎo)致反應(yīng)背景較高。
(2) 將標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加人到一次性的比色皿中 (應(yīng)該使用一次性的塑料比色皿或微孔板，因?yàn)槿玖蠒?huì)黏附到各種材料容器的表面上）。
(3)Bradford 試劑預(yù)熱至室溫。將 ImL 染料溶液加人到 25 uL 蛋白質(zhì)樣品中，混勻，室溫孵育 10 min。
(4) 檢測(cè) 450rnn 和 595nm 處的吸光度 (可以使用 570~610nm 的基于濾光器的儀器，對(duì)檢測(cè)性能不會(huì)有明顯的降低）。
(5) 對(duì) 595 nm 處的數(shù)據(jù)作圖，或?yàn)樘岣咴诘头磻?yīng)值處的精度，對(duì) 595 nm/450 nm 的比率作圖。標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)曲線可以擬合為一個(gè)多項(xiàng)式反應(yīng)，由此可以估算出待測(cè)樣品的濃度值.
