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蛋白質(zhì)親和純化概述
更新時間:2015-04-28 點擊次數(shù):1069

蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的重要手段,也是制備工業(yè)用酶、抗體、疫苗、基因重組藥物等的*途徑。蛋白純化的方法多種多樣。常用的有以下幾種方案:基于蛋白質(zhì)的溶解度不同設(shè)計的鹽析或等電點沉淀方法;基于蛋白質(zhì)分子量差異的透析與超濾或凝膠過濾方法;基于蛋白質(zhì)所帶電荷不同設(shè)計的等電聚焦電泳或離子交換層析方法;以及利用特異性配體與目的蛋白結(jié)合的親和層析法等等。相對核酸純化而言,不同蛋白質(zhì)的特性千差萬別,摸索純化條件往往是一項艱難而繁復(fù)的工作。


親和層析是利用生物分子間的親和吸附和解離而設(shè)計的層析方法,具有操作簡單、條件溫和、獲得的蛋白純度高等特點,特別適合于活性蛋白質(zhì)的純化,并且對表達量低的活性蛋白也具有良好的分離效果。常用的親和層析基質(zhì)包括:專門針對抗體的蛋白A或蛋白G親和基質(zhì),針對生長因子和核酸結(jié)合蛋白的肝素型親和基質(zhì),用于純化含有標簽的融合蛋白親和基質(zhì),以及結(jié)合了特異性抗體的親和基質(zhì)等。隨著基因重組表達技術(shù)的廣泛應(yīng)用,將目的蛋白與親和純化標簽進行融合表達,再通過親和層析法純化出目的蛋白,已成為實驗室zui常用的一項技術(shù)。


兩類瓊脂糖親和吸附基質(zhì),用于親和層析柱的制備。一類為用于純化帶有His或GST標簽的融合蛋白的金屬鎳基質(zhì)或GSH基質(zhì);另一類為用于純化多種來源的抗體以及免疫復(fù)合物的蛋白A和蛋白G交聯(lián)瓊脂糖親和吸附基質(zhì)。由于蛋白A和蛋白G對于不同種屬或亞型的抗體吸附能力不同,請參照表6.1選用合適的純化基質(zhì)。當(dāng)無法判別抗體來源或亞型時,可采用蛋白A/G雙重交聯(lián)基質(zhì),免去摸索純化條件所浪費的時間和材料。

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